蛋白酰基化（Acylation）是蛋白质翻译后修饰（PTM）中的一个重要类别，广泛参与调控细胞代谢、信号转导、染色质重塑等关键生物过程。近年来，随着蛋白质组学技术，特别是高分辨质谱的发展，高通量分析蛋白酰基化修饰成为可能，并逐渐应用于代谢调控、表观遗传学、肿瘤标志物发现等研究前沿。

一、什么是蛋白酰基化？

蛋白酰基化是指将一个酰基基团（如乙酰、丙酰、丁酰、马来酰、琥珀酰等）共价修饰在蛋白质上，常见修饰位点包括赖氨酸（K）和N-端氨基。其中以赖氨酸乙酰化（Lysine acetylation, Kac）最为经典，但近年来更多“非经典酰基化”类型，如丙酰化（Kpr）、丁酰化（Kbu）、琥珀酰化（Ksucc）、马来酰化（Kmal）等引起研究者关注。这些修饰与代谢状态紧密相关，因为它们的供体（如乙酰辅酶A、琥珀酰辅酶A等）直接来自细胞代谢通路，因而被认为是代谢与表观调控之间的重要桥梁。

二、高通量蛋白酰基化分析的技术流程概览

高通量酰基化分析主要基于质谱平台，结合抗体富集、特异酶切和多维分离等策略，核心流程如下：

1、样本制备与蛋白提取

• 细胞或组织裂解后使用含去酰基化酶抑制剂的裂解液（如TSA、NAM）防止修饰丢失；
• 使用SDS或urea裂解后进行蛋白质定量；
• 后续可采用FASP或in-solution法进行酶解。

2、酰基化肽段的富集

由于酰基化肽在总肽中丰度极低（常低于0.1%），高特异性的富集手段是成功检测的关键：

• 抗体富集：使用针对特定酰基化修饰（如anti-Kac、anti-Ksucc）的抗体进行免疫富集；
• 多重富集：可串联使用多种抗体，或结合HILIC等前处理手段增强特异性；
• TMT标记+富集：实现多样本并行分析（Multiplexing），提高通量与效率。

3、高分辨质谱检测

• 常用平台：Orbitrap Exploris、Q Exactive HF-X、TIMS-TOF Pro等；
• 建议使用DDA（Data-Dependent Acquisition）进行深度扫描，或结合DIA（Data-Independent Acquisition）获得更高覆盖度；
• 通过多级质谱（MS/MS或MS3）可提高修饰定位精度。

4、数据分析与修饰位点鉴定

• 搜索引擎：MaxQuant、Proteome Discoverer、Spectronaut（DIA）、PEAKS等；
• 修饰数据库：Unimod 提供标准酰基化修饰定义；
• 数据库搜索需考虑修饰质量偏移（如Kac为+42.0106 Da）；
• Site Localization Score（如ptmRS、Ascore）用于评估修饰位点可信度。

三、多种酰基化的并行分析：挑战与解决方案

1、修饰种类繁多、同位素干扰

多种酰基化修饰的质量偏移接近（如Kbu为+56.026 Da，Ksucc为+100.017 Da），易引起定量干扰。

解决方案：

• 严格控制修饰数据库设置，避免搜索歧义；
• 使用高分辨MS/MS，提升同分异构肽的区分能力；
• 采用串联抗体富集或顺序富集技术。

2、修饰与底物丰度变化交织

修饰水平变化不一定等于功能变化，还需结合蛋白表达量进行校正。

解决方案：

• 同步开展全蛋白组分析（Total proteome）；
• 通过标准化计算修饰/底物比值，挖掘真正调控机制。

3、样本通量受限

传统DDA方法一次最多只能分析10个样本。

解决方案：

• 引入TMT标记+抗体富集，实现16-plex甚至18-plex并行分析；
• 采用DIA+样本池设计，实现高通量筛查。

蛋白酰基化作为代谢信号与蛋白功能之间的纽带，其系统研究对理解复杂生命过程具有重要意义。通过高分辨质谱技术、特异抗体富集策略与多通量定量方法的整合，科研人员已可高效开展多种酰基化修饰的并行分析。在这一领域，百泰派克生物科技凭借先进的质谱平台与成熟的酰基化组学方案，助力您在表观代谢、疾病机制、靶点筛选等方向取得更具突破性的成果。如您正在探索相关课题，欢迎联系我们获取项目方案或技术资料。

~~

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目