人神经干细胞无动物源培养基

神经干细胞(neuralstemcell，NSCs)具有分化为神经神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新，并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。人神经干细胞无动物源培养基的原 理是利用特殊的培养基使成熟的神经细胞无法较长时间地成活，而分离筛选出能够在该培养条件下存活并增殖的神经干细胞群体。首先将含神经干细胞的神经组织通 过机械或酶解分散等方法制备成单细胞，然后培养于含有特殊营养添加剂和促增殖因子的不含血清的培养液中。非神经干细胞在这种培养系统中由于营养缺陷无法较 长时间地存活，而神经干细胞则适应该培养体系并在促增殖因子作用下生长增殖。因此，经过培养一段时间之后，就可获得通过这种自然筛选而增殖形成的呈神经球 状生长的神经干细胞群体。这种利用特殊培养基自然筛选神经干细胞方法的优点是：简便易行，不需要特殊的仪器设备等条件，分离效率高，神经干细胞损伤小易于 成活。

★ 产品货号

BW13002

★ 产品内容

 ★ 使用注意事项

1. 在配制完全培养基前，请把神经干细胞无动物源生长添加剂(NSCGS-xf)、青霉素-链霉素(P/S)放到2-8℃冰箱过夜解冻，然后加入到基础培养基中。

2. 在使用完全培养基前，需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热，注意温度不要超过37℃。

3. 请把配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存，并尽量在一个月内使用完。避免反复冻融，若培养基要分几次使用，请将间充质干细胞无动物源生长添加剂(NSCGS-xf)、青霉素-链霉素 (P/S)解冻按用量分装后保存。

★ 培养条件

37℃，5% CO2，无菌恒温培养箱培养。

★ 相关操作

原代神经干细胞培养

1.无菌条件下取脑组织，D-Hanks液充分漂洗后，在解剖显微镜下剥离脑膜，准确分离海马，用眼科剪将海马剪碎；

2.加入人神经干细胞无动物源培养基，用吸管吹打机械分离制作单细胞悬液；

3.台盼蓝染色后细胞计数，调整细胞浓度为5×104~5个/ml；

4. 置于24孔培养板中培养，每孔加入细胞悬液500μl；

5. 将培养瓶置于37℃，5% CO2的无菌恒温培养箱中培养。

注：NSC在培养液中呈漂浮的克隆球生长特性，最开始接种的细胞单个散存，胞体直径小，一般大约在10μm左右。通过24h培养使成纤维细胞等贴壁后，再取出细胞悬液培养，从而使细胞得到纯化，培养5d左右可形成较大的神经球。

神经干细胞传代培养

1.将原代培养形成的细胞球收集到离心管中，1000rpm离心5 min，弃上清，加入含1mmol/L DispaseⅡ消化1.5 h，0.01 mol/L PBS清洗3次；

2.重悬细胞，1000rpm离心5 min后弃上清；

3.加入人神经干细胞无动物源培养基重悬细胞，动作要轻柔，调整细胞密度到5×105个/ml接种到新的培养瓶中静置。

4.将培养瓶置于37℃，5% CO2的无菌恒温培养箱中培养，每隔1天半量换液。

5.每7 天传代一次。

神经干细胞冻存

神经干细胞冻存可用百恩维的“无DMSO无动物源细胞冻存液”,具体操作如下。

1. 细胞消化和计数，用胰酶对待冻存的细胞进行消化，并对细胞进行计数。

2. 1000rpm离心5分钟，去掉上清。

3. 根据细胞计数的情况，加入适量的冻存液，使细胞密度在3×106/ml左右（或根据自己希望达到的细胞密度）。

4. 轻轻地重悬细胞（务必重悬均匀），将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）中，旋紧冻存管盖。

5. 将冻存管放入程序降温冻存盒中，然后将冻存盒直接放入-80℃。

6. 第二天将细胞从-80℃转移到液氮中。

注：如客户用自己配制的冻存液冻存细胞，请避免用甘油作为保护剂。

神经干细胞复苏

1. 把人神经干细胞无动物源培养基放入37℃水浴中预热；
2. 从液氮中取出间充质干细胞迅速放入37℃水浴快速解冻（解冻后不要继续孵育细胞）；
3. 在超净台中加入5ml的人神经干细胞无动物源培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；
4. 弃上清，加入5ml的人神经干细胞无动物源培养基重悬细胞，转移到6孔板中；
5. 将培养瓶置于37℃，5% CO2的无菌恒温培养箱中培养；
6. 第二天，用新鲜的人神经干细胞无动物源培养基半量换液。